Diabetologia：激活但新功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到肝细胞自身抗纤到注意到1同型肾病诊断高血压的方面部将在学童时期就有良好的所述，多个肝细胞自身抗纤之前性的学童之前亦有70%在血液反转后10将近患上肾病，而随访15年的学童这一数量增高到84%。来得之下，占诊断1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的发病程序还没有给予前提的研究工作。

越来越多的人开始常用分期种系统来下定义1同型肾病的方面：个纤在注意到多种肝细胞自身抗纤时离开第1之前，注意到血糖异常时离开第2之前，注意到高血压时离开第3之前。一些多发肝细胞自身抗纤之前性的个纤，在1期和2期，方面速度快，并蓬勃发展为发病的1同型肾病。我们之前所述了一个大在首次侦测到多种肝细胞自身抗纤样品后至少10年无肾病的极快方面者，这分组高血压伤亡人数少，但构造非常明确。随后，我们发现肝细胞自身抗原特异性CD8+T细胞内自由基在方面缓快的高血压之前前提不存有，但在更进一步发病和长期存有的肾病高血压之前很容易侦测到。这或许指出，与方面高血压来得，这些高血压神经性自由基的调节增强。

早期研究工作指出，尽管调节性T细胞内(Treg)数量较长时间，但肾病高血压存有一些功能有缺陷，其之前包括对IL-2的自由基能力提高。此外，肾病高血压之前的不稳定性CD4+T细胞内或许对调节颇具抵抗性，表现为不稳定性T细胞内的抑止减弱，自然造成了的Treg和纤外造成了的其会Treg，以及抗原随之而来的CD4+T细胞内之前IL-2自由基减弱。本研究工作的目的是所述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极缓快方面者之前的构造，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的交叉研究工作，在21岁以下确诊的高血压直系亲属之前健康检查1同型肾病的可怕考量。我们之前所述了长期缓快方面者的构造，他们保证多重肝细胞自身抗纤之前性超过10年，但没有注意到肾病的诊断高血压，快性或非同步进行性神经性。随后，10名继续保证无肾病并主动共享大量血液样品的缓快方面者扩及T和B细胞内功能数据分析。在目前的研究工作之前，8名快方面者(SP分组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肝细胞自身抗纤之前性。所有的参与者都所处1同型肾病方面的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗纤对某些抗原的之前性自由基，然而，一名高血压不太或许所处2期至少6年，但没有注意到诊断高血压，一名高血压被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集科学实验样品时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析之前对该供纤同步进行了之外审核。分立外周血单个核细胞内(PBMCs)，采行多参数流式细胞内术和T细胞内抑止试验审核供纤之前Treg的基频、表同型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无指派聚类数据分析，审核Treg表同型。

结果：与身心健康供纤来得，来自快方面纤的心灵CD4+T细胞内的指派聚类推断，激光阴的心灵CD4+ Treg基频增高，与糖皮质激素其会的TNFR相关蛋白(GITR)隐含增高有关。一名HbA1c增大的高血压与方面缓快者和匹配的对照分组来得，Treg谱大同小异。功能数据分析指出，与身心健康供纤来得，来自缓快方面纤的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞内抑止明显受损。表现为对不稳定性CD4+T细胞内CD25和CD134隐含的抑止增高。

左图1 深入的表同型数据分析推断，CD4+Treg亚同型在快方面表头之前增高。由FlowSOM填充的Treg四楼，聚集在来自所有供纤的光阴CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物隐含鉴定出10个元簇:心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)常用9个相同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个路由表代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由表分组周围上色。每个路由表之前的饼左图指出单个标识的隐含高级别。(b)每个元聚类的热左图，以推断适度标识隐含。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)填充左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起丰度为每个metacluster箱子新线左图(丰度> 0.05%)断定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞内(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞内(l)。深蓝色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 常用CITRUS的预测模同型证实，Treg基频的增高是方面缓快的标志。分级门控(a - f)和葡萄数据分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的权威性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR隐含同步进行分立，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)分组以及供纤SP 606(深蓝色)之前CD25+ cd127的基频汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱子新线左图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD表头密切关系的相同。(j)箱子新线左图推断了在SP(黑纹)和HD(灰点)分组之前，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比起丰度(数量)。(k)直方左图推断每个簇的表同型(粉红色)和Treg标识比起隐含与时代背景隐含(红色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。时代背景与所有其他簇之前标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与身心健康献血者来得，方面缓快者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T细胞内元簇(心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个隐含标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的隐含热左图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR隐含串联，推断直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有供纤包括，p< 0.05(红色)供纤SP 606和匹配的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)串联，推断直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自缓快方面的CD4+ treg细胞内高度集之前不稳定性CD4+T细胞内的能力提高。SP分组用红色的新线和红色指出，HD分组用黑色的新线和红色指出，深蓝色的新线/红色指出供纤sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标识为CFSE, Treg按观察的数量试样。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培训3天后同步进行流式细胞内术侦测。(a-d)与CD4+；也者比起应的treg培训(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止多于。常用之前性对照(激光阴的响应细胞内不含treg)计算抑止多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 不稳定性CD4+T细胞内对缓快方面的T细胞内酪氨酸的抑止更敏感。SP分组用红色的新线和红色指出，HD分组用黑色的新线和红色指出，深蓝色的新线/红色指出供纤sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标识，treg按观察的数量试样。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培训3天后同步进行流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者协同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止三份(b)。(c,d) CD25抑止三份(c)和CD134抑止三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训之前的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自缓快方面子的酪氨酸心灵CD4+Treg在GITR隐含之前给予了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1同型肾病风险个纤之前的差异性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28